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人表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒實驗使用說明書
發(fā)布時間:2025/4/28瀏覽:113次
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  人表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒使用說明

  BS-0182  人表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒

  實驗原理

  本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術,通過將純化的EGF捕獲抗體包被于微孔板形成固相抗體,依次加入樣本、標準品和HRP標記的檢測抗體,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物。經(jīng)洗滌后加入TMB底物顯色,在HRP酶催化下產(chǎn)生藍色產(chǎn)物,酸化后轉為黃色,顏色深度與樣本中EGF濃度呈正相關,最終在450nm波長下測定OD值。

  試劑盒組成與樣本處理

  樣本類型?:適用于血清、血漿(EDTA/檸檬酸鹽/肝素抗凝)、組織勻漿、細胞培養(yǎng)上清及其他生物液體

  樣本保存?:2-8℃可保存48小時,長期保存需-20℃或-70℃冷凍,避免反復凍融

  樣本稀釋?:尿液至少需20倍稀釋(10μl樣本+190μl稀釋液),血清/血漿可能需要預實驗確定稀釋倍數(shù)

  標準品配制?:使用前加1ml蒸餾水配成20ng/ml溶液,通過系列倍比稀釋(從900μl稀釋液開始)建立標準曲線

  檢測程序

  加樣?:空白孔加50μl稀釋液,其余孔加50μl標準品或待測樣本,37℃孵育40分鐘

  洗滌?:使用1×洗滌液充分洗滌4-6次,每孔350μl,每次浸泡1-2分鐘后拍干

  加檢測抗體?:空白孔加100μl抗體稀釋液,其余孔加100μl生物素化抗體工作液,37℃孵育30分鐘

  加SABC復合物?:每孔100μl,37℃孵育20分鐘

  顯色?:加100μl TMB底物,37℃避光反應10-20分鐘(顯色時間需根據(jù)實際情況調(diào)整)

  終止與讀數(shù)?:每孔加100μl終止液,30分鐘內(nèi)在450nm波長測定OD值

  技術參數(shù)

  檢測范圍?:3.9-250pg/mL(典型范圍,不同品牌有差異)

  靈敏度?:1.53-1.6pg/mL

  重復性?:板內(nèi)變異系數(shù)<10%,板間變異系數(shù)<10%

  特異性?:與人EGF類似物無明顯交叉反應

  注意事項

  所有試劑使用前需恢復至室溫,液體組分充分混勻

  嚴格避免泡沫產(chǎn)生和交叉污染,不同濃度樣本需更換槍頭

  洗滌步驟對結果準確性至關重要,需確保洗滌充分

  底物溶液變?yōu)樗{色表明失效,不得使用

  剩余板條應立即密封保存于干燥環(huán)境,建議1個月內(nèi)用完

  實驗廢棄物應按傳染物規(guī)范處置

  建議標準品和樣本做雙孔檢測,每次實驗都需建立標準曲線

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